Milieu urée tryptophane
Le milieu Urée-tryptophane, improprement appelé urée-indole est un milieu de culture synthétique utilisé en bactériologie permettant la mise en évidence simultanée :
- De la production d'indole (par l'hydrolyse du tryptophane par la tryptophanase) ;
- De l'hydrolyse de l'urée (par une uréase) ;
- La désamination du tryptophane par la tryptophane désaminase.
Composition
- L-tryptophane ............................... 3 g - Urée ........................................ 20 g - Hydrogénophosphate de potassium ............. 1 g - Dihydrogénophosphate de potassium ........... 1 g - Chlorure de sodium .......................... 5 g - Éthanol à 95 % .............................. 10 mL - Rouge de phénol ............................. 25 mg - Eau distillée (qsp) ......................... 1 L
Préparation
À stériliser par filtration (utiliser de l'eau stérile pour limiter la contamination initiale).
Lecture
- A uréase -
- B uréase +
- C indole +
- D indole -
- E TDA +
- milieu rouge (basique) : uréase +
- milieu orange ou jaune : uréase -
- après addition de réactif de Kovacs : anneau rouge (indole +), anneau jaune (indole -)
- après addition de chlorure de fer III : marron (TDA +), jaune (TDA -)
Production d'indole
La réaction d'hydrolyse du tryptophane, catalysée par la tryptophanase, produit de l'indole, de l'acide pyruvique et de l'ammoniac selon l'équation suivante :
L'indole produit est mis en évidence par le réactif de Kovacs ou le réactif de James. Le diméthylamino-4-benzaldéhyde du réactif de Kovacs réagit avec l'indole avec formation d'un composé rouge.
Hydrolyse de l'urée
Elle est catalysée par l'uréase, il y a production de dioxyde de carbone et d'ammoniac. Ce dernier alcalinise le milieu. Cette alcalinisation du milieu est mise en évidence par le virage du rouge de phénol au rose.
Désaminasation du tryptophane
Consulter l'article à propos de la tryptophane désaminase.
L'acide indole-pyruvique est mis en évidence par sa complexation en un composé marron foncé en présence d'ions fer III (ferriques, ).